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【瑞士步琦】【應(yīng)用】同一系統(tǒng)上使用Flash和制備HPLC色譜純化多肽

步琦 2025-05-29 | 閱讀：67

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同一系統(tǒng)上使用

Flash和制備HPLC色譜純化多肽

色譜應(yīng)用

”

簡介

固相多肽合成（SPPS）是科學(xué)研究、臨床和商業(yè)合成領(lǐng)域中最常用的多肽合成路徑。由于反應(yīng)通常產(chǎn)生多種長度的肽鏈，所以這些反應(yīng)混合物的提純非常具有挑戰(zhàn)性。使用大孔反相填料色譜柱和制備 HPLC 能夠得到高純度的結(jié)果，所以常用于此類純化。不過，多肽反應(yīng)通常很復(fù)雜，含有很多雜質(zhì)。將此樣品引入昂貴的制備 HPLC 柱和系統(tǒng)中會產(chǎn)生額外的消耗，而且需要較多時間進(jìn)行樣品純化。Pure Prep 系統(tǒng)既能運行制備 HPLC 也能運行 Flash 色譜模式，令您從容選擇使用制備 HPLC 還是更經(jīng)濟(jì)的 Flash 色譜。FlashPure 大孔 Flash 柱填裝高效的 20μm 粒徑的填料，分離度高，這是分離很靠近的化合物分子諸如多肽等特別需要的。在此我們證明，如何在同一系統(tǒng)上使用 FlashPure Flash 柱和 HPLC 柱純化復(fù)雜的多肽反應(yīng)物，并使最終純度超過95%。

實驗材料和方法

樣品	樣品1（Flash色譜）	樣品2（制備HPLC）
多肽混合物	25mg 反應(yīng)混合物	15mg 反應(yīng)混合物
目標(biāo)多肽鏈長	20 個氨基酸	15 個氨基酸
多肽序列	CQQYNRPYXXXGGTKLEIKR-NH2	CAKHYYYGGXXXMDY-NH2

純化	Flash 色譜	Prep 色譜
儀器系統(tǒng)	Pure flash 模式	Pure Prep 模式
Flash 柱芯/色譜柱	FlashPure WP C18 12g	Vydac 150HC，22×150mm，10um
梯度/檢測器	A=水 B=乙腈+0.1%TFA	A=水 B=乙腈+0.1%TFA
進(jìn)樣模式	液體進(jìn)樣	液體進(jìn)樣

分析	分析型 HPLC
系統(tǒng)	Agilent 1200
色譜柱	Kromasil C18 100×4.6mm，3um
流動相	A=水+0.1%TFA B=20%水，80%乙腈+0.1%TFA
梯度	樣品1：20分鐘內(nèi)10-50%B 樣品2：20分鐘內(nèi)15-55%B
檢測波長	UV214nm
進(jìn)樣模式	液體進(jìn)樣-多種進(jìn)樣體積

結(jié)果與討論

純度結(jié)果	純化前純度	純化后純度
樣品1（Flash 色譜純化）	58.5%	95%
樣品2（Prep 色譜純化）	55.9%	98.9%

結(jié)論

通過以上實驗證明：使用反相 Flash 柱和 HPLC 色譜柱，成功地在同一系統(tǒng)上進(jìn)行了多肽純化，得到純度超過 95% 的餾分。高效大孔 Flash 色譜填料提供了堪比制備 HPLC 色譜柱水平的純度，Pure Prep 系統(tǒng)既能夠運行制備 HPLC 也能運行 Flash 色譜模式，您可以自如選擇使用制備 HPLC 或更經(jīng)濟(jì)的一次性 Flash 色譜柱。