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凱氏定氮法是測(cè)定蛋白質(zhì)/氮含量的常用方法，該方法簡(jiǎn)單易操作，但由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中涉及到的步驟以及使用的試劑較多，因此出現(xiàn)問(wèn)題后排查起來(lái)會(huì)費(fèi)時(shí)費(fèi)力。本文匯總了客戶在凱氮實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的應(yīng)用問(wèn)題，并逐一分析給出解決方法，旨在幫助客戶發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并及時(shí)排查解決。

問(wèn)

1.1 稱量誤差：

檢查天平是否平穩(wěn)，天平周圍是否有其他儀器干擾，是否有靜電干擾

1.2 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染：

重新取樣，或更換標(biāo)準(zhǔn)品

1.3 玻璃器皿污染：

清洗玻璃器皿

1.4 蒸餾殘留：

減少液體總量，300mL 樣品管中的樣品量應(yīng)不超過(guò) 150mL，以避免樣品量過(guò)多噴濺嚴(yán)重；在堿加入樣品管前，使用水稀釋樣品管中酸也能減低噴濺程度

1.5 實(shí)驗(yàn)環(huán)境中有游離氨：

檢查進(jìn)行定氮的實(shí)驗(yàn)室是否放置了氨水等含揮發(fā)性氨試劑

1.6 滴定劑濃度錯(cuò)誤：

檢查滴定液的計(jì)算和濃度、 摩爾反應(yīng)系數(shù)（每摩爾鹽酸含 2 摩爾 H+、每摩爾硫酸含 2 摩爾 H+）、滴定劑系數(shù)；對(duì)滴定酸進(jìn)行標(biāo)定，重新計(jì)算

1.7 滴定系統(tǒng)、滴定管、玻璃管中有空氣：

檢查滴定酸液位，如滴定酸不足及時(shí)補(bǔ)充，并在滴定系統(tǒng)上進(jìn)行排液操作

1.8 pH 電極故障：

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)電極，必要時(shí)進(jìn)行更換，如使用標(biāo)準(zhǔn)緩

沖鹽進(jìn)行校準(zhǔn)多次仍不能通過(guò)滴定儀要求則建議更換

1.9 手工滴定指示劑變性：

重新配置母液

1.10 計(jì)算錯(cuò)誤：

重新計(jì)算，更換實(shí)驗(yàn)員對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果核對(duì)

問(wèn)

2.1 稱量誤差：

檢查天平是否平穩(wěn)，天平周圍是否有其他儀器干擾，是否有靜電干擾

2.2 滴定劑濃度錯(cuò)誤：

檢查滴定液的計(jì)算和濃度、 摩爾反應(yīng)系數(shù)（每摩爾鹽酸含 2 摩爾 H+、每摩爾硫酸含 2 摩爾 H+）、滴定劑系數(shù)；對(duì)滴定酸進(jìn)行標(biāo)定，重新計(jì)算

2.3 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染：

重新取樣，或更換標(biāo)準(zhǔn)品

2.4 樣品中的氮含量較高：

減少樣品量，樣品中氮含量不可超過(guò) 200mg

2.5 樣品轉(zhuǎn)移過(guò)程損失：

避免天平轉(zhuǎn)移到樣品管過(guò)程中，樣品損失，或掛壁

2.6 玻璃器皿污染：

清洗玻璃器皿

2.7 消解硫酸不足：

增加硫酸用量（依據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般常量法比如 1g 左右樣品試用 20mL 濃硫酸，半微量法使用 10 mL 濃硫酸）

2.8 消化時(shí)發(fā)生泄漏：

檢查抽吸模塊密封性

2.9 消解時(shí)發(fā)生噴濺：

調(diào)整加熱檔，使消解儀緩慢升溫，避免樣品因噴濺造成損失

2.10 催化劑與硫酸比例不對(duì)：

糾正催化劑與濃硫酸的使用比例在 1：3—1：2

2.11 消解未完成：

延長(zhǎng)消解時(shí)間，保證樣品澄清后繼續(xù)消解 30 分鐘

2.12 消解后未完全冷卻：

消解后冷卻至少 30 分鐘

2.13 NaOH 加入量不足或所用的 NaOH 濃度不正確 (應(yīng)為 32 %)：

糾正用量，直到可以觀察到在堿加入后樣品顏色發(fā)生變化

2.14 蒸餾時(shí)發(fā)生泄漏：

進(jìn)行蒸汽力度測(cè)試

2.15 滴定劑濃度錯(cuò)誤：

檢查滴定液的計(jì)算和濃度、 摩爾反應(yīng)系數(shù)、滴定劑系數(shù)；對(duì)滴定酸進(jìn)行標(biāo)定，重新計(jì)算

2.16 pH 電極故障：

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)電極，必要時(shí)進(jìn)行更換，如使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖鹽進(jìn)行校準(zhǔn)多次仍不能通過(guò)滴定儀要求則建議更換

2.17 手工滴定指示劑變性：

重新配置母液

2.18 計(jì)算錯(cuò)誤：

重新計(jì)算，更換實(shí)驗(yàn)員對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果核對(duì)

問(wèn)

3.1 稱量誤差：

檢查天平是否平穩(wěn)，天平周圍是否有其他儀器干擾，是否有靜電干擾

3.2 樣品非均質(zhì)：

由于樣品的不均質(zhì)導(dǎo)致結(jié)果不平行，請(qǐng)重新均質(zhì)樣品

3.3 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染：

重新取樣，或更換標(biāo)準(zhǔn)品

3.4 樣品轉(zhuǎn)移過(guò)程損失：

避免天平轉(zhuǎn)移到樣品管過(guò)程中，樣品損失，或掛壁

3.5 玻璃器皿污染：

清洗玻璃器皿

3.6 消解時(shí)發(fā)生噴濺：

調(diào)整加熱檔，使消解儀緩慢升溫，避免樣品因噴濺造成損失

3.7 消化時(shí)發(fā)生泄漏：

檢查抽吸模塊密封性

3.8 尾氣吸收抽吸力不足：

檢查尾氣吸收儀管路密封性，定期清洗尾氣吸收儀的泵

3.9 消解期間抽吸力太強(qiáng)：

使用旁路閥降低尾氣吸收裝置的抽吸力

3.10 消解未完成，消解時(shí)間太短：

延長(zhǎng)消解時(shí)間，保證樣品澄清后繼續(xù)消解 30 分鐘

3.11 蒸餾時(shí)發(fā)生泄漏：

進(jìn)行蒸汽力度測(cè)試

3.12 蒸餾和滴定時(shí)攪拌器不工作：

清洗攪拌器，必要時(shí)進(jìn)行更換

3.13 滴定系統(tǒng)、滴定管、樣品管中有氣泡：

檢查滴定酸液位，如滴定酸不足及時(shí)補(bǔ)充，并在滴定系統(tǒng)上進(jìn)行排液操作

3.14 pH 電極校準(zhǔn)不正確或未校準(zhǔn)：

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)電極，必要時(shí)進(jìn)行更換，如使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖鹽進(jìn)行校準(zhǔn)多次仍不能通過(guò)滴定儀要求則建議更換

3.15 滴定管被堵塞、松脫、太短或損壞：

檢查滴定管，清潔或重新連接

3.16 手工滴定指示劑變性：

重新配置母液

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