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本文摘要

在本文及其所涉及的完整版白皮書中，介紹了NanoSigh Pro開發(fā)的細(xì)胞外囊泡（EVs）的熒光標(biāo)記和檢測(cè)方法，以及指導(dǎo)這些方法實(shí)施的代表性數(shù)據(jù)。

通過(guò)光散射和熒光分析評(píng)估細(xì)胞外囊泡大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團(tuán)，不僅正式了EVs的存在，而且還有效地檢測(cè)了其表面和內(nèi)部RNA貨物上的四次跨膜蛋白生物標(biāo)志物。

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細(xì)胞外囊泡（EVs）因其不斷發(fā)展的應(yīng)用和突破而引起了人們?cè)絹?lái)越大的探索興趣，特別是在疾病診斷和治療潛力領(lǐng)域。這些由活生物體內(nèi)的細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)最初被認(rèn)為是細(xì)胞廢物。然而，研究揭示了它們?cè)诩?xì)胞通訊中的關(guān)鍵作用。例如EVs的組成，可以反映其來(lái)源細(xì)胞的生理或病理狀態(tài)，使之成為一些列疾病的生物標(biāo)志物，從癌癥到神經(jīng)退行性疾病和炎癥性疾病。

準(zhǔn)確表征EVs制劑的大小、異質(zhì)性和濃度可分析、了解生物功能和診斷提供重要信息。但從體液中提取的細(xì)胞外囊泡伴隨著非EVs成分，形成了相當(dāng)多樣化的異質(zhì)的系統(tǒng)，這對(duì)分析表征提出了重大挑戰(zhàn)。

由于EVs的復(fù)雜性，通常采用多種技術(shù)方法來(lái)全面表征EVs，包括流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）、質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)、基于顯微鏡的方法和納米顆粒跟蹤分析（NTA）。

NTA已成為快速表征細(xì)胞外囊泡高分辨率大小和濃度的常用技術(shù)。

NTA光學(xué)裝置示意圖

在本文涉及的研究報(bào)告中，使用來(lái)自尿液的EVs，通過(guò)光散射和熒光分析評(píng)估其大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團(tuán)，通過(guò)直接標(biāo)記抗體進(jìn)行生物標(biāo)志物檢測(cè)，使用NanoSight Pro對(duì)樣品進(jìn)行納米顆粒跟蹤分析，對(duì)每次熒光測(cè)量應(yīng)用適當(dāng)?shù)募す獠ㄩL(zhǎng)和熒光長(zhǎng)通濾光片，在NS Xplorer軟件的專屬熒光模式下，可在單次測(cè)量中對(duì)光散射和熒光進(jìn)行組合分析，不僅報(bào)告尺寸分布，還直接報(bào)告濃度和熒光效率。

本白皮書闡述了如何使用NanoSight Pro探索各種標(biāo)記方法，遵循染料特性（例如光穩(wěn)定性和亮度）、樣品制備方法（例如抗體親和力和特異性、孵育條件）和測(cè)量條件（例如樣品呈現(xiàn)、儀器設(shè)置、測(cè)量時(shí)間）等一些簡(jiǎn)單的規(guī)則，來(lái)實(shí)現(xiàn)熒光NTA檢測(cè)EVs亞群，從而揭示細(xì)胞外囊泡EVs的不同特性。